Пцр легких что это
ПЦР-тестирование: как работает метод ПЦР в диагностике
ПЦР – высокоточный метод диагностики и одно из самых главных открытий в области биологии за последние десятилетия. ПЦР-анализ применяется уже почти 40 лет и считается наиболее точным и чувствительным способом диагностики инфекционных заболеваний.
ПЦР – уникальный и универсальный метод, тест используется не только в клинической лабораторной диагностике, но также в биологии, криминалистике, археологии и многих других научных областях. Все, что нужно для проведения анализа – небольшое количество любого биоматериала пациента.
Суть метода ПЦР
ПЦР – полимеразная цепная реакция. Метод основан на обнаружении даже небольших концентраций искомого элемента диагностики. Для определения изначально крайне малых концентраций РНК или ДНК, которые необходимо определить в процессе проведения основного этапа исследования, используется метод искусственного увеличения количества РНК или ДНК. А поскольку они специфичны и строго индивидуальны для каждого микроорганизма или живого существа за счет уникальности последовательности нуклеотидов во фрагментах, ошибка в определении целевого ДНК или РНК исключена.
Генетическая информация любого живого организма записывается в ДНК. Эта молекула состоит из двух цепочек, сплетающихся в единую спираль. Некоторые вирусы (например, COVID-19) хранят свой код в РНК – одной нити нуклеотидов.
Для каждого организма, включая вирусы, бактерии и грибки, последовательность нуклеотидов уникальна. Ее можно сравнить с отпечатком пальца или сканом сетчатки глаза человека. Укороченные последовательности нуклеотидов, характерные для каждого вида патогена (возбудителя опасных заболеваний), хранятся в базах научных лабораторий в виде праймеров – отдельных участков ДНК, типичных для только конкретного возбудителя. Эти участки значительно короче любой молекулы ДНК. Такие праймеры присоединяются к ДНК возбудителя в пробе и под действием катализаторов многократно воспроизводят свои дубли. Этот процесс называются «репликация» – многократное увеличение, дублирование искомого участка до тех пор, пока он не станет доступен для определения. Процесс репликации возможен только при наличии в пробе ДНК возбудителя.
Преимущества метода ПЦР
Какие есть недостатки
Показания к проведению ПЦР-анализа
Подготовка к проведению ПЦР-теста
Как проводится ПЦР-анализ
Результаты ПЦР-теста
Результаты анализов, проведенных методом ПЦР, известны уже через один день. Иногда возможно проведение экстренного теста – его часто используют при оказании срочной медицинской помощи при госпитализации. Тогда срок готовности результата сокращается до считанных часов.
Результаты ПЦР-теста дадут точную информацию о том, какая инфекция была обнаружена. При количественном тестировании анализ определит также вирусную или бактериальную нагрузку на организм. В этом случае в результатах будет значиться титр обнаруженного патогена (его количество в одном миллилитре пробы). Количественный анализ особенно важен при диагностике заболеваний, спровоцированных условно-патогенными микроорганизмами, которые присутствуют в норме практически у каждого человека. Такие микроорганизмы представляют угрозу только при большой численности, а в остальных случаях мирно сосуществуют с носителем.
Микобактерии, ДНК (Mycobacterium tuberculosis complex, ПЦР) соскоб, кач. в Москве
Исследование проводят в целях диагностики туберкулеза легких. Методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в соскобе из зева устанавливают наличие генетического материала Mycobacterium tuberculosis.
Приём и исследование биоматериала
Когда нужно сдавать анализ Микобактерии, ДНК (Mycobacterium tuberculosis complex, ПЦР) соскоб, кач.?
Подробное описание исследования
Исследование направлено на диагностику туберкулеза дыхательных путей — мультисистемного заболевания с множеством проявлений, которое является наиболее распространенной причиной смертности от инфекционных заболеваний во всем мире. По данным ВОЗ, в 2015 году было зафиксировано 1,4 млн случаев смерти от туберкулеза, среди которых 0,4 млн человек имели ВИЧ.
Россия входит в число стран с наиболее высоким показателем распространенности туберкулеза, хотя в последние 10 лет в этом направлении наблюдается положительная тенденция: снижается число как новых случаев заражения, так и доля носителей из общего числа больных.
Как правило, данное заболевание поражает легкие (85% случаев), но может затрагивать и другие органы, в том числе кости. Источниками инфицирования являются больные люди с открытой формой заболевания — выделяющие возбудителя в окружающую среду со слюной.
Симптомами заболевания являются:
Если речь идет о легочной форме заболевания, симптомы могут включать:
При внелегочной форме симптомы будут зависеть от области поражения.
Mycobacterium tuberculosis complex — общее название близкородственных бактерий, которые являются возбудителями туберкулеза. Они имеют множество факторов патогенности, которые позволяют им долго выживать в окружающей среде и избегать иммунного ответа. Микобактерия туберкулеза является внтуриклеточным паразитом, тем самым, будучи поглощенной клетками иммунной системы, возбудитель инактивирует ферменты данных клеток, оставаясь жизнеспособной. Благодаря этим свойствам микобактерий туберкулез — достаточно опасное заболевание, особенно для людей с ослабленным иммунитетом. Заражение происходит, как правило, воздушно-капельным путем, когда инфицированный человек чихает или кашляет, в редких случаях для заражения достаточно даже разговора с больным. Также туберкулез может передаться даже от беременной женщины плоду еще в утробе.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — метод исследования, позволяющий обнаружить ДНК возбудителя в биоматериале даже в небольшом количестве. ПЦР на M. Tuberculosis, согласно международным клиническим рекомендациям, не является стандартом диагностики данного заболевания. Данный тест используется в качестве дополнительного. «Золотой стандарт»: Проба Манту, T-SPOT, диаскин или квантифероновый тест.
Как узнать, есть ли в организме коронавирус и антитела к нему?
На сегодняшний день не осталось людей, неосведомленных о COVID-19. Весь мир убедился в высокой скорости его распространения и опасности осложнений. Теперь актуальным стал вопрос раннего выявления заболевания для ограничения контактов.
Тест на коронавирус позволяет определить, попал ли возбудитель в кровь пациента. Мы разберем, какими методами он проводится, можно ли пройти его самостоятельно, как интерпретировать результат.
ПЦР-тест — это основной метод исследования биологических жидкостей на коронавирус. Он давно используется для выявления всевозможных инфекций в организме человека. ПЦР расшифровывается как полимеразная цепная реакция.
Тест основан на лабораторном изучении фрагмента ДНК во взятом материале. Фрагмент многократно удваивают и наблюдают, повторяется ли в нем искомый участок. Эксперимент показывает, есть ли коронавирус в организме человека. При этом определить его наличие можно даже до появления первых симптомов. Инкубационный период составляет до шести дней. За это время инфекция может поразить большое количество людей. Если вовремя сделать ПЦР-тест, пациент будет изолирован. Это предотвратит распространение вируса.
Кому и как проводят ПЦР-тест на ковид?
Подобные исследования проводят повсеместно с целью сдерживания опасной инфекции. В большинстве случаев это происходит добровольно, но иногда обязанность обусловлена требованиями закона.
Сдать ПЦР-тесты должны все путешественники, прибывающие в Россию. Причем условия одинаковы не для всех. Для иностранцев отрицательный результат теста — фактически пропуск в страну. Соотечественники же могут посетить лабораторию позднее.
Сделать это должен:
ПЦР-тест проводится путем забора мазка из носоглотки. Сделать его можно в лаборатории или вызвав врача на дом. Реакцию запускают в лабораторных условиях.
Результат теста: как интерпретировать?
Для полимеразной цепной реакции требуются сутки. Однако с учетом загруженности лабораторий сроки ожидания могут увеличиться до двух-трех дней. Результат трактуется однозначно. Наличие ДНК COVID-19 означает заражение. Отрицательный тест на вирус позволяет допустить его отсутствие в организме.
Почему только допустить? Результат исследования может быть неточным. При получении ложноотрицательного есть вероятность, что:
Вероятность ложноположительного результата невелика. Такое возможно, если тестирование проводилось в антисанитарных условиях (вирус попал в биоматериал после забора).
Достоверно ли экспресс-тестирование?
Различают такие виды экспресс-теста: исследование методом иммунохроматографии, использование набора реагентов. В первом случае человеку предлагается сдать кровь в медицинском учреждении. У анализа есть преимущества:
Однако точность его вызывает сомнения. Экспресс-анализ показывает только присутствие компонентов вируса, а не его самого. Поэтому все положительные пробы важно перепроверять методом ПЦР.
С экспресс-наборами (например, Standard Q Covid-19) человек работает сам. Это не аналог иммунохроматографии: кровь здесь не понадобится, достаточно мазка из носоглотки. Что именно нужно делать — написано в инструкции.
При контакте биоматериала с реагентом происходит реакция с окрашиванием (как с тестом на беременность). Такое исследование на коронавирус достаточно быстрое (до 20 минут), однако не слишком точно.
Тест на антитела
Антитела к коронавирусу, выявленные в организме, показывают его реакцию на возбудитель. Если он вырабатывает специфические иммуноглобулины, это может означать, что:
Если тестирование показало, что антитела к коронавирусу присутствуют, это еще не значит, что их носитель больше никогда не заболеет.
Хотя статистика имеется небольшая, вирусологи пришли к выводу, что положительный тест на антитела может ненадолго приравниваться к вакцинации. Однако это справедливо в течение полугода после выявления инфекции. По истечении этого срока вновь появляются риски, и пациенту рекомендована прививка.
Как расшифровать анализ на антитела?
Обследуемый на антитела может иметь в организме несколько видов белков, вырабатываемых иммунной системой:
Если в анализе на антитела есть IgA, значит, человек столкнулся с коронавирусом. Если их сопровождают IgG, то больной выздоравливает, если нет — инфекционное заболевание протекает в данный момент. Об устойчивости иммунной системы к вирусу говорит показатель IgG более 1,1.
Возможен ли экспресс-анализ?
Пройти диагностику на антитела можно и в домашних условиях. Например, Leccurate SARS-CoV2 Antibody Test позволяет самостоятельно провести хроматографический иммуноанализ крови. Брать ее можно как из пальца, так и из вены, хотя второй способ без медсестры реализовать сложно. Проходить экспресс-диагностику на антитела лучше натощак. В набор входит одноразовый ланцет для прокола кожи.
Кровь помещается в лунку тестового устройства, где смешивается с буферной жидкостью. Индикаторная реакция происходит в течение 10-20 минут. В зависимости от окрашивания определенных зон, можно обнаружить наличие IgM, IgG или их отсутствие.
Какой метод диагностики лучше?
Формулировать вопрос таким образом не совсем корректно. Речь идет о двух методах с разными задачами. Тест на коронавирус, проводимый через полимеразную цепную реакцию, позволяет определить, болеет обследуемый или нет. Сравнивать его можно только с анализом крови и экспресс-наборами. Картина по итогам полноценного теста более достоверна.
Обследование на антитела параллельно может подсказать, нет ли инфекции в организме на данный момент. Однако в первые дни такой метод неэффективен. Иммунный ответ формируется не сразу, поэтому ошибочный вывод об отсутствии вируса не связан с несовершенством анализа. На это требуется до 14 дней, потом по наличию IgA можно судить о состоянии больного.
Самая главная рекомендация — не стоит намеренно заражаться COVID-19 с целью формирования антител. Коронавирусная инфекция малоизученна — нельзя предсказать, как она будет протекать в конкретном случае. К тому же, антитела формируются не навсегда и вакцинацию не заменяют.
Во избежание случайного заражения важно:
Эффективным методом профилактики вирусных заболеваний является вакцинация. Она в России добровольная — обязать делать прививку не может никто. Идти на такой шаг стоит после изучения возможных рисков, определения противопоказаний и сопоставления с ожидаемыми последствиями инфицирования.
Врачи и фармакологи постоянно объясняют, почему нельзя прививаться детям, беременным, аллергикам, людям с тяжелыми реакциями на другие вакцины в анамнезе. При наличии иных ограничений нужна консультация специалиста.
10 фактов о кашляющих соседях, школьных Манту и туберкулезе, который недолечили
В прошлом году в России выявили более 61 тысячи новых случаев туберкулеза. Как не пополнить эту статистику?
Несмотря на стойкую тенденцию к снижению заболеваемости и смертности, Россия по-прежнему входит в 30-ку стран с наибольшей распространенностью туберкулеза. Призыв врачей регулярно проходить обследование на туберкулез более чем оправдан, и вот 10 фактов тому в подтверждение.
Факт 1: уровень жизни не так важен
Туберкулез долгое время считался болезнью людей с низким уровнем жизни. На почве этого убеждения выросла проблема стигматизации, которую эксперты сейчас называют одной из главных помех в деле борьбы с туберкулезом: страх огласки заставляет многих скрывать диагноз даже ценой отказа от лечения. В реальности уровень жизни уже не влияет на риск заражения палочкой Коха, вызывающей туберкулез. По данным ВОЗ, четверть жителей планеты инфицированы, и далеко не все они находятся за чертой бедности или в местах лишения свободы. Однако социальный статус, по мнению экспертов, может повлиять на вероятность развития туберкулеза и эффективность лечения. Запустить процесс могут плохое питание, например, или стрессы, от которых, впрочем, никто не застрахован. Остро стоит проблема приверженности лечению – больные с низким социальным статусом чаще отказываются от лечения или прерывают его.
Факт 2: достаточно нескольких бактерий
У современного человека, живущего в городе, много шансов познакомиться с туберкулезной палочкой. Сам факт встречи, впрочем, не означает, что туберкулез неизбежен: это может не случиться, потому что иммунная система человека умеет подавлять инфекцию.
Большой процент инфицированности населения микобактериями туберкулеза объясняется в том числе ее устойчивостью к внешним условиям. Например, в уличной пыли они могут жить до 3 месяцев, в домашней — до года, а в тепле, влажности и без солнечного света — больше 5 лет. Туберкулезная палочка комфортно чувствует себя в воде и на любых поверхностях, например, в доме, если там не устраивают генеральных уборок с хлорсодержащими средствами. Больной при этом выделяет микобактерии в окружающую среду совершенно обычными образом – с частичками мокроты. Не обязательно плевать кровью себе под ноги – это будет происходить каждый раз при кашле, чихании и даже разговоре. При тесном контакте в условиях жилья, офиса или закрытого учреждения этого вполне достаточно, и за год больной может заразить в среднем 10-15 человек. Для инфицирования достаточно вдохнуть всего лишь несколько микобактерий.
Факт 3: курение и диабет повышают риск
По статистике, только 10 процентов инфицированных микобактериями людей заболевают в течение жизни. Есть обстоятельства, которые увеличивают вероятность развития туберкулеза. Вот они:
сахарный диабет, язвенная болезнь
длительный прием некоторых препаратов – глюкокортикоидов, цитостатиков, иммунодепрессантов
активное употребление алкоголя
детский и подростковый возраст
тяжелые напряженные условия труда, безработица
Факт 4: некоторые не заболеют, но их немного
В мире живут люди с генетической устойчивостью к микобактериям – их примерно 2 процента. Иммунная система в их случае надежно подавляет рост туберкулезной палочки. Для таких людей риск развития туберкулеза нулевой. В пользу врожденной устойчивости говорит отсутствие рубца после вакцинации и ревакцинации БЦЖ и стабильно отрицательная проба Манту. Хотя в большинстве случаев отсутствие рубца или реакции на пробу Манту все же объясняется тем, что БЦЖ не было, вакцину ввели неправильно или были нарушены условия ее хранения и она просто не подействовала. Также рубец может быть почти незаметным после введения БЦЖ-M (вакцина «щадящей» иммунизации).
Факт 5: кашля может и не быть
Симптомы, которые должны насторожить и стать поводом для обследования на туберкулез, – беспричинное снижение веса, лихорадка, ночная потливость, хронический кашель, не связанный с ОРВИ. В народе сложилось устойчивое мнение, что кашель – основной признак. Сосед кашляет – это подозрительно. Близкий стал кашлять — пора на флюорографию. Никто не кашляет – все в порядке. На самом деле туберкулез, как и многие серьезные болезни, на ранних стадиях не имеет никаких симптомов или перечисленное может присутствовать в легкой форме, не внушающей опасений. Кашель присоединяется, когда нарушается функция легких. Именно поэтому обследование на туберкулез должно проводиться регулярно, а не по требованию.
Факт 6: обследование – это не один анализ
Такой диагноз, как туберкулез, не ставится ни по результатам одной пробы или анализа, ни по заключению одного врача. Это многоэтапный процесс. Вот, например, как все происходит у детей.
До 7 лет включительно делается проба Манту. Для оценки размера папулы нет общих стандартных критериев, она всегда проводится с учетом предыдущих показателей. Если результат меняется с отрицательного на положительный, говорят о том, что произошел вираж пробы. Это не означает, что у ребенка может быть туберкулез. После 8 лет проводится Диаскинтест.
Если проба Манту выходит за рамки нормы, назначают диаскинтест или лабораторные тесты. При отрицательном результате обследование прекращается. При положительном ребенку показан осмотр фтизиатром и дообследование – анализы крови, мочи, по возможности мокроты, а так же компьютерная томография. Цель – исключить или подтвердить активный процесс.
При нормальных результатах КТ проводится терапия латентного туберкулеза – в стационаре или на дому. Если активный туберкулезный процесс подтвержден, случай разбирается специальной врачебной комиссией, которая направляет ребенка на лечение в стационар.
Факт 7: есть предболезнь, которую надо лечить
Латентный туберкулез — это своего рода предболезнь: палочка Коха уже размножается, но человек еще не выделяет ее во внешнюю среду. В таком случае рентген и КТ не показывают туберкулезные очаги в легких, однако исследование крови или внутрикожная проба будут положительными. Проблема в том, что взрослый человек обычно ограничивается флюорографией и в отсутствие других симптомов больше не обследуется. Однако при латентном туберкулезе, несмотря на нормальное самочувствие пациента, врачи назначают превентивную химиотерапию, чтобы не допустить развития болезни.
Факт 8: туберкулез излечим
Туберкулез лечится и излечивается. Курс лечения длится в среднем полгода, применяется сочетание нескольких антибиотиков, через 3 недели после начала терапии больной перестает выделять микобактерии во внешнюю среду. Важен определенный образ жизни – скрупулезное выполнение предписаний врача, богатое белками питание, режим дня, нормальный отдых. Поэтому даже в тех странах, где не практикуется длительное пребывание больного в стационаре, процесс лечения контролирует медицинский работник или волонтер.
Факт 9: тем не менее от него умирают
Несмотря на успехи в лечении туберкулеза, он по-прежнему входит в 10 основных причин смертности на планете – наряду с инсультом, ХОБЛ, диабетом, раком легких и ДТП. Основные причины – поздно выявленная болезнь (без лечения умирают две трети больных), неправильное назначение препаратов или их плохое качество, низкая приверженность лечению у определенных категорий больных, а так же лекарственно-устойчивые формы (МЛУ-ТБ). По статистике ВОЗ, в странах Евросоюза, где ситуация с таким туберкулезом лучше, чем в целом по региону, показатель успешности лечения МЛУ-ТБ не превышает 45 процентов.
Факт 10: нельзя останавливаться
Количество больных, прекративших терапию по собственному желанию, в некоторых регионах РФ достигает 53 процентов. Это одна из причин лекарственно-устойчивого туберкулеза. Почти половина таких случаев в мире приходится на три страны – Индию, Китай и Россию.
Два наиболее эффективных препарата первой линии для лечения туберкулезной инфекции, – рифампицин и изониазид. О лекарственно-устойчивом туберкулезе говорят, когда микобактерии перестают реагировать на один из них или на оба. МЛУ-ТБ может развиться не только на фоне неправильной терапии, устойчивой туберкулезной палочкой можно заразиться. Схемы лечения такого туберкулеза существуют, но они несравнимо дороже, сложнее и длительнее, а прогноз хуже. Кроме того, устойчивость палочки Коха может быть и широкой – то есть распространяться на большее число антибиотиков. По данным ВОЗ, такой туберкулез официально зарегистрирован в 117 странах мира. Зачастую лечить больного с широкой лекарственной устойчивостью оказывается нечем. Именно поэтому крайне важно не только вовремя диагностировать туберкулез, но и правильно пролечить его.
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ТАБЛИЦА СКРИНИНГОВЫХ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ТУБЕРКУЛЕЗА
| Реакция Манту | Диаскин тест | Квантифероновый тест | T-SPOT.TB | |
|---|---|---|---|---|
| Метод исследования | Кожный тест | Кожный тест | Анализ крови из вены | Анализ крови из вены |
| Побочные реакции | Возможны | Возможны | Нет | Нет |
| Противопоказания | Есть | Есть | Нет | Нет |
| Оценка результата | Субъективная | Субъективная | Объективная | объективная |
| Ложноположительный результат после БЦЖ | Часто | Отсутствует | Отсутствует | Отсутствует |
| Выявляет стадию туберкулеза | Активную | Активную | Латентную и активную | Латентную и активную |
| Использование при беременности | Запрещено | Запрещено | Разрешено | Разрешено |
Диаскинтест
Внутрикожная проба с аллергеном туберкулезным рекомбинантным. Позволяет определить, происходит ли в организме размножение микобактерий, и обнаружить в том числе латентную туберкулезную инфекцию. Не подходит для выявления лиц, которым нужна ревакцинация БЦЖ, имеет ряд противопоказаний – например, карантин в детских учреждениях, острые инфекционные заболевания или хронические в фазе обострения, аллергические реакции.
T-SPOT.TB
Т-SPOT.ТБ – современный метод иммунологической диагностики латентной туберкулезной инфекции по анализу крови.
МЕТОДИКА T-SPOT ТЕСТ НА ТУБЕРКУЛЕЗ РЕКОМЕНДУЕТСЯ:
Квантифероновый тест
Иммуноферментный тест, выявляет специфический гамма-интерферон для определения туберкулеза. Обладает высокой специфичностью, на результат не влияет наличие прививки БЦЖ, перекрестные реакции, текущее состояние здоровья пациента. Положительный результат означает активный туберкулез или скрыто протекающее заболевание.
Рентгенологические методы
Для диагностики туберкулеза назначается рентгеновский снимок легких (или флюорография для массового скрининга) и компьютерная томография, которые позволяют обнаружить в легких активный туберкулезный процесс. Опасения насчет неинформативности флюорографии или доз облучения, получаемых при регулярном обследовании, не имеют оснований.
T-SPOT.TB: кому и когда нужен
Все существующие тесты можно разделить на две группы – скрининговые и подтверждающие. Главное преимущество первых – дешевизна, скрининговыми обследованиями должно быть охвачено как можно большее количество людей. У взрослых скрининг на туберкулез – это флюорография. Однако она может выявить только очаги в легких, но не носительство инфекции или латентный туберкулез. Детям, которым не показан рентген, делают кожные пробы. Проблема в том, что они часто дают ложноположительный результат. И чтобы избавить впоследствии родителей и ребенка от походов по врачам и необходимости в некоторых случаях все же делать рентгенологическое исследование, можно выполнить исследование крови – например, T-SPOT.TB.
Такой анализ можно рекомендовать не только при положительном результате кожной пробы. Второй случай – когда в принципе невозможно сделать пробу Манту. Дело не только в отказе родителей, бывают медицинские противопоказания. Третья ситуация, когда анализ крови показан – это обследование людей из групп риска: в первую очередь это медперсонал, люди с иммунодефицитными состояниями (ВИЧ, системные заболевания, требующие приема иммунодепрессантов, онкозаболевания и пр.), те, кто был в контакте с больным туберкулезом. В принципе, если не попадающий ни в одну из категорий человек сделал, например, флюорографию, но отрицательный результат его по какой-то причине не удовлетворил (допустим, у него есть настораживающие симптомы), он тоже может прояснить ситуацию с помощью такого теста.