Пцр тест у кошек что это

Анализ ПЦР у кошки – о чем говорит положительный результат исследования?

Если у кошки появляются симптомы болезни, хозяину предлагают сдать животному анализ ПЦР. Показанием является подозрение на такие недуги, как токсоплазмоз, панлейкопения, герпес-вирус, гельминтоз, патогенные грибки. Существует несколько видов биоматериала, необходимые для исследования, а сам анализ проводится в 4 этапа. От правильного проведения процедуры зависит результат.

Пцр тест у кошек что это. Смотреть фото Пцр тест у кошек что это. Смотреть картинку Пцр тест у кошек что это. Картинка про Пцр тест у кошек что это. Фото Пцр тест у кошек что это

По мнению ветеринаров, ПЦР-диагностика очень точная, поскольку этим методом можно определить вирус даже в самом минимальном количестве.

Что такое ПЦР и как проводится?

Полимеразная цепная реакция позволяет выявить возбудителя инфекционных недугов или гельминтоза. Для проведения анализа применяются специальные ферменты, которые вводят в пробы собранного материала. Вещество копирует ДНК болезнетворного микроба. Затем полученные фрагменты соотносят с видом микроорганизма, занесенного в базу данных, а также определяется его количество в биоматериале. Это позволяет обнаружить возбудителя на клеточном уровне или если его антигенная изменчивость повышена. Для проведения анализа подходит следующий биоматериал:

Этапы исследования

После взятия биоматериала, ПЦР у кошек проводится таким образом:

Когда проводится анализ?

Исследование ПЦР имеет несколько разновидностей и назначается котам при заболеваниях, показанных в таблице:

Название комплексаПри каких недугах проводится
РеспираторныйРинотрахеит
Токсоплазмоз
Микоплазмоз
Аденовирус
Заражение хламидиями
ВирусныйПанлейкопения
Вирус иммунодефицита
Вирусная лейкемия или перитонит
Инфекционная анемия
Инфекции слизистыхСтафилококк или стрептококк
Папиллома ½ типа
УрогенитальныйЗаражение патогенными грибками и хламидиями
Цитомегаловирус
Уреаплазмоз
Инфекции, вызванные клещамиБабезиоз
Риккетсиоз
Анаплазмоз
СтоматологическийАктиномицеты
Гингивалис при стоматите, кариесе, патологическом расшатывании зубов
ДерматологическийДерматиты любой этиологии (трихофитон, малассезия, микроспорум)
Бактриально-дерматологическийБактериальное поражение кожи, такими как стафилококк, стрептококк, микроорганизмы группы кишечной палочки
ПаразитарныйЗаражение сосальщиком, анкилостомой, токсокарой для выявления гельминтоза

Вернуться к оглавлению

Как интерпретируется результат?

Устанавливает диагноз и делает выводы исследования только ветеринар. Самостоятельная интерпретация запрещена. Положительный результат считается при обнаружении частиц ДНК патогенного микроорганизма. Это указывает на заболевание и назначается соответствующее лечение. Отрицательным результатом является отсутствие специфических ДНК-фрагментов.

Источник

О рекомендациях как подготовиться к сдаче ПЦР-теста на COVID-19

В условиях сохранения рисков распространения новой коронавирусной инфекции Роспотребнадзор напоминает, что при сдаче ПЦР-теста необходимо соблюдать определенные рекомендации.

Что будет, если есть или пить перед сдачей мазков для теста ПЦР?

По инструкции к наборам для ПЦР-исследования на SARS-CoV-2 взятие мазков рекомендуется проводить не раньше 3-4 часов после последнего приёма пищи. Почему это важно?

Коронавирус SARS-Cov-2 живет внутри эпителиальных клеток. Для ПЦР-исследования важно получить мазок с достаточным количеством инфицированных клеток. В момент проглатывания еды эпителиальные клетки механически слущиваются пищевым комком с поверхности слизистой оболочки. Если взять мазок сразу после еды, в пробирку может попасть недостаточное количество инфицированных клеток. В этом случае, пациент может получить ложноотрицательный результат анализа. То же самое касается питья. Вода смывает с поверхности миндалин, задней стенки глотки инфицированные клетки.

Можно ли пользоваться лекарственными средствами в нос и горло (капли, спреи, антисептики) перед сдачей мазков?

Перед взятием мазков ни в коем случае нельзя использовать лекарственные средства для местного применения (капли, спреи и др). После их применения количество вируса на слизистой снижается и увеличивается вероятность получения ложноотрицательных результатов ПЦР-теста.

Можно ли употреблять алкоголь перед сдачей теста ПЦР и как это повлияет на результат?

Алкоголь содержит этиловый спирт (этанол), который также входит в состав многих антисептических средств. По рекомендациям Роспотребнадзора, для эффективного антисептического действия в составе дезинфицирующего средства должно быть не менее 60-80% этилового спирта. Хотя в состав спиртных напитков (обычно) входит меньше этанола, чем необходимо для дезинфекции, но после приема алкоголя вероятность выявления коронавируса в мазке также может снизиться.

Почему нельзя чистить зубы перед сдачей теста ПЦР?

Основная цель на этапе взятия мазков для ПЦР-исследования – получить биологический материал с достаточным количеством клеток, пораженных коронавирусом. Применение любых очищающих средств для полости рта снижает количество вируса в получаемом мазке. Зубная паста может содержать антисептические компоненты. Попадание ее остатков в пробирку с мазком может мешать проведению анализа. Кроме того, чистка зубов требует еще и дополнительного полоскания рта, что также не рекомендовано перед забором биоматериала.

Применение косметики (помады, блески и бальзамы для губ) может повлиять на результат теста?

Материал для исследования берут не из полости рта, а из зева и носоглотки. Если соблюдать все правила взятия мазка и не прикасаться зондом к губам, то наличие декоративной косметики не должно помешать получению адекватного материала для ПЦР-теста. Но при случайном попадании в пробу косметические средства могут замедлить ПЦР-реакцию. Поэтому лучше декоративную косметику нанести уже после того, как мазок был взят.

Откуда все-таки берут мазок – из зева или носоглотки?

И из зева, и из носоглотки. Входными воротами для вируса SARS-CoV-2 являются верхние дыхательные пути. После попадания на слизистые носо- и ротоглотки (зева) вирус начинает размножаться в эпителиальных клетках. Поэтому в конце инкубационного периода и в первые дни клинических проявлений наиболее информативными являются мазки именно из этих областей. Для исследования мазок берут с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки. При взятии мазка из носоглотки зонд вводят по наружной стенке носового хода на достаточную глубину. Мазок, взятый со слизистой преддверия носа, может не выявить РНК коронавируса SARS-CoV-2.

Минимум за 3 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) нельзя: принимать пищу, пить, чистить зубы, полоскать рот/горло, использовать спрей-освежитель для ротовой полости, жевать жевательную резинку, курить.

Минимум за 3 часа до взятия мазков из носоглотки нельзя: промывать нос, использовать спреи, капли, мази для носа.

За два дня до взятия мазка рекомендуется отказаться от употребления спиртных напитков.

Источник

ПЦР или ИФА. Когда необходимы оба исследования, а когда можно обойтись одним из них?

Пцр тест у кошек что это. Смотреть фото Пцр тест у кошек что это. Смотреть картинку Пцр тест у кошек что это. Картинка про Пцр тест у кошек что это. Фото Пцр тест у кошек что этоДавайте поговорим об одном из важнейших вопросов в диагностике инфекционных заболеваний у животных. На данную тему многое сказано и написано, но у владельцев и заводчиков до сих пор возникают вопросы и сложности. В настоящее время ИФА (иммуноферментный анализ) и ПЦР (полимеразная цепная реакция) являются наиболее достоверными методами диагностики инфекционных заболеваний у животных и человека. Основанные на последних достижениях молекулярной биологии, данные способы исследования быстро вошли в ветеринарную практику и, тем самым, значительно подняли общий уровень диагностики в целом. Каждый из этих методов позволяет оценить ситуацию с определенной стороны, в зависимости от цели, которая ставится при исследовании.

ПЦР – один из самых точных и чувствительных методов в лабораторной диагностике. Он обнаруживает макромолекулы ДНК или РНК возбудителей даже в случае присутствия незначительного их количества в пробе. Генетический материал бактериальной или вирусной инфекции индивидуален, а это значит, что метод обладает самой высокой специфичностью. Принцип ПЦР заключается в том, что происходит многократное избирательное копирование искомого участка генетического кода предполагаемой инфекции. Таким образом, ПЦР – «золотой стандарт» выявления инфекционных агентов. Важным достоинством является то, что вирусные инфекции можно обнаруживать сразу после заражения, за недели или месяцы до того, как проявятся первые симптомы. Метод ПЦР незаменим для выявления латентных (скрытых) и хронических инфекций.

ИФА – это лабораторный иммунологический метод качественного определения и количественного измерения антител к различным возбудителям инфекций, а именно – антигенам. Также антигенами могут выступать собственные клетки организма, образующиеся в результате аутоиммунных или онкологических заболеваний. Метод ИФА обладает высокой чувствительностью и специфичностью, которая в настоящее время составляет более 90% и позволяет обнаружить реакцию организма животного на инфекционный процесс.

Пцр тест у кошек что это. Смотреть фото Пцр тест у кошек что это. Смотреть картинку Пцр тест у кошек что это. Картинка про Пцр тест у кошек что это. Фото Пцр тест у кошек что этоДостоинства ИФА — возможность диагностики через 1-3 недели после контакта с возбудителем инфекции и возможность прослеживать динамику развития заболевания.

ИФА, относясь к непрямым методам диагностики, основан на выявлении не самой инфекции, а продуктов ее жизнедеятельности в организме животного — белков–маркеров – иммуноглобулинов, которые вырабатывает иммунная система в ответ на инфекцию. Для каждого возбудителя заболевания продуцируются сугубо индивидуальные антитела, которые впоследствии и будут идентифицированы системой ИФА. Время обнаружения антител зависит как от самой инфекции, так и от особенностей иммунной системы конкретного животного.

Метод ИФА ищет «следы» реакции на вторжение инфекции, а не саму инфекцию!

Наличие иммуноглобулинов не гарантирует присутствия в организме искомого инфекционного агента.

Отсутствие антител не говорит о том, что инфекции нет.

Если результат анализа методом ИФА положительный, то это значит, что нужно искать инфекцию более специфическими методами – ПЦР, бактериологические посевы.

Определить, какой лучше сдать анализ для диагностики, в каждой конкретной ситуации может только врач, назначающий обследование. Для комплексной оценки инфекции, в некоторых случаях, может потребоваться как выявление самого возбудителя (ПЦР), так и определение антител к нему в организме животного (ИФА), с последующим контролем после проведенного лечения.

Случается, что результаты ПЦР и ИФА-диагностики могут не совпадать и в этом случае необходимо грамотно интерпретировать полученные результаты, основываясь на патогенезе предполагаемого инфекционного заболевания.

Пцр тест у кошек что это. Смотреть фото Пцр тест у кошек что это. Смотреть картинку Пцр тест у кошек что это. Картинка про Пцр тест у кошек что это. Фото Пцр тест у кошек что это

Амплификатор BIO RAD T-100

Во-первых, стоит помнить, что ПЦР может сказать о наличии возбудителя только в месте взятия биоматериала, которое ограничено (например, смывом из глаза или из носа). Для ИФА–диагностики разницы в месте нет, поскольку ИФА «реагирует» на антитела, которые вырабатываются при инфекционном процессе любой локализации. Как результат — ПЦР–диагностика дает отрицательный, а ИФА — положительный результат. Например, микроорганизмы семейства Chlamydiacеae могут локализироваться в организме животных в различных местах. И анализ ПЦР, взятый в неправильной области, ДНК хламидии не обнаружит. Но ИФА–метод все равно выявит выработку антител, сопровождающую инфекционный процесс. В таком случае необходимо сдавать оба анализа для подтверждения инфекционной природы заболевания.

Единственным ограничением продукции антител в организме при наличии инфекции может быть иммунодефицитное состояние у животного, например, при лейкозе или иммунодефиците у кошек.

Во-вторых, если результат ИФА пришел положительным, то не стоит сразу приступать к лечению инфекционного заболевания, необходимо сопоставить данный результат с клинической картиной и, возможно, результатами других методов обследования. Известно, что после пройденного курса лечения антитела могут оставаться в организме очень долго, даже после того, как инфекция покинула тело, то есть остается так называемый «серологический шрам» – след от уже перенесенной инфекции. Причем, в связи с индивидуальными особенностями иммунной системы, положительный результат ИФА–диагностики, вызванный повышенным содержанием антител, может сохраняться несколько месяцев и даже лет после полного выздоровления животного. Но возможно и обратное, например, после лечения хламидиоза, микоплазмоза – заболеваний, поражающих органы дыхания, желудочно-кишечный тракт, репродуктивные органы, уровень антител в крови значительно снижается, так как иммунитет против этих заболеваний у животных не развивается.Пцр тест у кошек что это. Смотреть фото Пцр тест у кошек что это. Смотреть картинку Пцр тест у кошек что это. Картинка про Пцр тест у кошек что это. Фото Пцр тест у кошек что это

Следует помнить, что антитела в организме могут образовываться в ответ на недавнюю вакцинацию и высокий их уровень, очевидно, может быть связан с искусственным введением антигена в организм животного.

Немаловажно то, что материал, взятый сразу после лечения инфекции, может содержать мертвые частицы микроорганизмов, которые метод ПЦР идентифицирует за счет своей высокой чувствительности. В таком случае, результат будет ложноположительный.

Хронические инфекционные заболевания могут стать причиной разницы в результатах ИФА и ПЦР. При этом зачастую ПЦР дает положительный, а ИФА — отрицательный результат. Уставшая от хронического инфекционного процесса иммунная система может «не показать» повышенный уровень антител к инфекции. Подобное может наблюдаться и в том случае, если инфекция «свежая», даже при наличии определенных симптомов заболевания уровень антител в крови не превысит норму, поскольку они еще не начали вырабатываться. При данных ситуациях необходимы не только оба исследования, но и клинический анализ крови, и дополнительные методы оценки клеточного иммунитета.

Получение положительного результата ПЦР может быть вызвано использованием тест-систем, которые выявляют все виды бактерий, в том числе и те, которые в определенном количестве в норме содержатся в организме животного. Например, тест-система для ПЦР–диагностики настроена на выявление всех видов микроорганизмов семейства Chlamydiaceae: Chlamydophila Pneumonia, C. Psitaci, C. Abortus, C. felis. Однако хламидиями заражено примерно 18-38% собак, а клинически выраженный хламидиоз встречается в спорадических случаях. Носительство хламидий выявляется также у 65-70 % кошек. Кошки – латентные носители возбудителя (содержится в слюне, моче, экскрементах, на лапках внешне здоровых животных). Поэтому положительный результат ПЦР–анализа в таком случае должен быть правильно интерпретирован врачом, согласован с материалом исследования, картиной заболевания и, обязательно, ИФА – диагностикой крови пациента.

Другой пример: у кошек встречается несколько видов микроорганизмов рода Mycoplasma, чаще всего М. felis и М. gatae. Это частые обитатели слизистых оболочек, М. felis и М. gatae обнаруживаются у 70-80% здоровых кошек. Предполагается, что М. felis может быть патогенной, а М. gatae – естественный коммерсал конъюнктивы и верхних дыхательных путей кошек (то есть безвредная микрофлора). При проведении ПЦР–анализа результат может быть положительным, а ИФА – отрицательным, вследствие отсутствия специфической реакции организма на присутствующую условно-патогенную микрофлору, следовательно, возможное заболевание, например, конъюнктивы глаз было вызвано не данным микроорганизмом.

Ветеринарному врачу необходимо понимать патогенез того или иного заболевания, так коронавирусная инфекция кошек, вызываемая семейством Coronaviridae, а именно штаммами FIPV, подавляет иммунитет, и антитела к возбудителю могут и не обнаруживаться. Положительный результат ИФА говорит о наличии в организме коронавируса, но не дает информации о том, где этот вирус находится – в кишечнике или в тканях.

В связи с этим важным является непосредственное выявление возбудителя заболевания – ПЦР. Однако использование метода ПЦР не может позволить провести дифференциацию условно-патогенных и патогенных штаммов в организме и отличить состояние носительства от заболевания, вызывающего тяжелый перитонит, как прави­ло, с летальным исходом. Положительный ответ ПЦР при выделении вируса с фекалиями говорит о том, что животное в данный момент представляет опасность для окружающих кошек. Согласно ряду исследований, некоторые кошки, в организме которых еще находится вирус, перестают распространять его в течение нескольких недель. Но есть вероятность длительного вирусоносительства, с повторяющимися периодами выделения вируса во внешнюю среду со слюной и фекальными массами.

Подводя итоги, можно сказать, что и ИФА, и ПЦР–анализы сами по себе не являются панацеей в диагностике инфекций. Нельзя одной ПЦР или ИФА–диагностикой заменить все существующие методы исследования, ими можно лишь дополнить их, позволив всем методам достигнуть реальных, точных, достоверных результатов.

Заведущая лабораторий – Тосторожева А.Б. ВЛДОЦ СТАТУС. Март 2017 г.

Источник

Пцр тест у кошек что это

В лабораторной диагностике ветеринарной клиники «Стелла» доступны: ПЦР-комплексы для выявления ДНК возбудителей, вызывающих инфекции, глистные инвазии и болезни кожи у собак и кошек, а также ПЦР-диагностика по определению пола у птиц и выявлению цирковируса птиц. Кроме этого, диагностика хламидиоза/микоплазмоза/уреаплазмоза теперь проводится путем выделения в культуре клеток, что позволяет более рационально подходить к лечению этих инфекций.

ПЦР-комплексы для собак

Стоимость каждого комплекса – от 1500 до 2000 рублей, что значительно дешевле ПЦР-диагностики, проводимой по несколько взятым возбудителям. Время исследования – 1-2 суток.

ПЦР-комплекс респираторный для собак №1 (респираторный коронавирус, вирус парагриппа, чума, стрептококк, стафилококк) – комплексный анализ для выявления инфекционных патогенов у собак с симптомами поражения верхних дыхательных путей (кашель, ринит, коньюктивит, лимфаденит, гипертермия). Актуально для щенков, подобранных на улице или взятых из приютов. Первый этап для диагностики «питомникового кашля», так как он может вызываться любым из перечисленных возбудителей.

ПЦР-комплекс респираторный для собак № 2 (аденовироз, бордетеллез, герпесвирус, хламидиоз, микоплазмоз) – диагностический комплекс на выявление патогенов, наиболее часто вызывающих воспаление верхних дыхательных путей и коньюктивы. Является вторым этапом для диагностики «питомникового кашля», при условии получения отрицательного анализа по комплексу № 1.

ПЦР-комплекс для собак № 3 вирусный (парвовирус, коронавирус, ротавирус, чума, боррелиоз) – этот вид исследования предпочтителен для собак, особенно щенков, с симптомами поражения желудочно-кишечного тракта – диарея, рвота, повышенная температура, резкое исхудание, артрит. Парвовирус и коронавирус

ПЦР-комплекс для собак № 4 инфекции, поражающие печень (токсоплазмоз, бабезиоз, инфекционный гепатит, лептоспироз, гемобартонеллез) – анализ проводится собакам, у которых присутствуют признаки поражения печени – анемия, рвота, диарея, желтушность сдизистых оболочек, признаки гепатомегалии на УЗИ.

ПЦР-комплекс для собак № 5 клещевые инфекции (эрлихиоз 1 тип, тейлериоз, бабезиоз, анаплазмоз) – анализ проводится собакам, у которых в анамнезе присутствуют укусы клещей, анемия невыясненной этиологии, гепатит.

ПЦР-комплекс для собак № 6 клещевые инфекции (гепатозооноз, эрлихиоз тип 2, бартонеллез, боррелиоз – болезнь Лайма) – анализ проводится собакам, у которых в анамнезе присутствуют укусы клещей, анемия невыясненной этиологии, артрит (полиартрит), гепатит, а также вторым этапом после комплекса № 5, когда не удается выяснить причину анемии.

ПЦР-комплексы для кошек

ПЦР-комплекс респираторный для кошек №1 (аденовирус, токсоплазмоз, ринотрахеит, хламидиоз, микоплазмоз) – необходим для выявления патогена, вызывающего конъюктивит, ринит (слезотечение, чихание, кашель). Эти инфекции наиболее часто встречаются у кошек, приобретенных в питомниках и подобранных на улице. При выявлении микоплазмы рекомендуется дополнительно сдать анализ на определение чувствительности к антибиотикам.

ПЦР-комплекс урогенитальный для кошек № 2 (уреаплазмоз, токсоплазмоз, хламидиоз, микоплазмоз, цитомегаловирус) – рекомендуется обследовать кошку перед вязкой, а также кота, во избежание внутриутробного инфицирования плодов. Также обследуется кошка, если вязки были неудачными или ветврач диагностирует цистит, пиометру.

ПЦР-комплекс для кошек № 3 вирусный (иммунодефицит, инфекционный перитонит, лейкемия, гемобартонеллез, панлейкопения) – данный вид комплексного обследования желательно проводить породистым кошкам – британцам и шотландцам, аббисинцам, персидским породам. Но не забываем и про домашних кошек! В каком случае? Если наблюдается диарея неясной этиологии, истощение, анемия, гингивит, дерматит, увеличение объема живота. Очень часто встречается одновременно несколько инфекций.

ПЦР-комплекс для кошек № 4 инфекции слизистых оболочек (вирус паппиломы тип 1 и 2, вирус саркомы, стрептококк и стафилококк) – для диагностики берется смыв, если у кошки образовались паппиломы, язвы или опухоли в ротовой полости (если ветврачом исключена калицивирусная инфекция или терминальная стадия почечной недостаточности).

ПЦР-комплекс для кошек № 5 клещевые инфекции (анаплазмоз, тейлериоз, бабезиоз, риккетсиоз) – вопреки мнению, при укусах клещей кошкам, как и собакам, передаются кровепаразиты, которые разрушают эритроциты и вызывают гепатит, нефрит. Очень часто протекают скрыто. Поэтому, если у животного наблюдается анемия, гепатит, желудочно-кишечные расстройства, особенно после укуса клещом, его кровь лучше проверить на кровепаразитов.

Общие комплексы для собак и кошек:

ПЦР-комплекс для обнаружения микрофлоры, вызывающей пародонтит (трепонема, актинобациллы, порфирономас гингивалис и другие)– стоматолог может назначить этот вид диагностики, если обнаруживает у животного чрезмерное отложение зубного налета, стоматит, пародонтит, кариес, расшатывание зубов. Выделение возбудителя позволяет правильно назначить лечение и подобрать антибиотики.

ПЦР-комплекс для выявления бактериальной микрофлоры кожи (золотистый стафилококк, стрептококк, кишечная палочка, протей мирабилис) – актуален при дерматитах собак и кошек, хорьков, когда животное длительно страдает и ситуация не позволяет ждать результатов бакпосева.

ПЦР-комплекс для выявления гельминтов (анкилостомоз, токсокароз, криптоспоридиоз, описторхоз) – очень часто у щенков и котят глистные инвазии протекают скрыто. Животное здорово на вид, хорошо кушает. Яйца гельминтов не всегда выделяются с калом. Поэтому обычный анализ на яйцеглист иногда оказывается ложноотрицательным. В данном случае лучше проводить ПЦР-исследование на наличие гельминтов.

Подробную информацию об исследованиях узнавайте по телефонам: 8 (495) 709-8465, +7-909-930-69-60.

Источник

ПЦР-диагностика

Полимеразно-цепная реакция (ПЦР) – это одно из самых ярких достижений в сфере молекулярной биологии. Метод получил широчайшее распространение в разных областях науки. Благодаря очень высокой специфичности и чувствительности, метод ПЦР применяется в медицине, биологии, ветеринарии, криминалистике, санитарной службе и других отраслях деятельности человека.
Для анализа методом ПЦР можно использовать любые биологические материалы, которые содержат нуклеиновые кислоты (молекулу ДНК или РНК).

Принцип ПЦР- исследования

Кому мы обязаны появлением метода ПЦР?

Со слов американского биохимика Керри Мюллиса (Kary Mullis), идея идентифицировать живые организмы по короткому участку их генетического кода (ДНК) пришла ему в голову в 1983 году, по пути с работы домой. А в основе этой идеи, лежала работа другого американского биохимика, Артура Корнберга (Arthur Kornberg), которая в свое время не нашла отклика у научного сообщества.

Керри допустил возможность того, чтобы взять молекулу ДНК какого-либо организма, с помощью высокой температуры «распустить» ее спираль на две нити, специфическими маркерами-праймеры пометить уникальные для этого микроорганизма участки ДНК и затем, применив фермент ДНК-полимеразу, создать из двух нитей две новые молекулы ДНК. Но уже содержащие в себе меченные праймеры. И потом останется просто искать эти участки в диагностическом материале.

В итоге, корпорация CETUS, в которой работал Мюлис, выделила ему команду ученых. И в 1985 году, в издании Американского общества генетики человека, появилась публикация с теоретическим обоснованием ПЦР, как метода идентификации генетического материала живых организмов.

Как это все происходит в лаборатории

Пцр тест у кошек что это. Смотреть фото Пцр тест у кошек что это. Смотреть картинку Пцр тест у кошек что это. Картинка про Пцр тест у кошек что это. Фото Пцр тест у кошек что это

Выделение ДНК

Элонгация

Или синтез. После завершения процесса отжига, в реакционной смеси создают условия для активности полимеразы. Фермент, ориентируясь на молекулы праймеров (а не исходных нуклеиновых кислот), начинает синтез новых ниток ДНК/РНК. Которые становятся копиями исходных, искомых молекул нуклеиновых кислот.
Такой температурный цикл проводится 30 и более раз. В результате, даже при изначально небольшом количестве искомого генетического материала, в реакционной смеси накапливается значительное число «помеченных» праймерами нуклеиновых кислот (растет экспоненциально, с удвоением при каждом цикле).Обнаружить большие количества ДНК/РНК намного проще, за счет чего реализуется еще одно преимущество ПЦР – высочайшая чувствительность.

Детекция

Оценка результатов ПЦР проводится несколькими путями:

Преимущества методики ПЦР

Всего разработано более 10 разных методик амплификации, применяемых лабораториями в зависимости от исходных условий и поставленных целей.
Общим для них есть высокая чувствительность (для положительного результата достаточно 40 (!) или менее искомых копий ДНК в 1 мл образца, то есть вероятность ложноотрицательного ответа ничтожно мала. И очень высокая специфичность: вероятность ложноположительного ответа составляет менее 1%.
Но точность результатов сильно зависит от качества сбора диагностического материала, тщательного соблюдения всех технических требований к каждому этапу и качеству оборудования, расходных материалов (буфера, праймеров, раствора для отмывки и т.д.).

Пцр тест у кошек что это. Смотреть фото Пцр тест у кошек что это. Смотреть картинку Пцр тест у кошек что это. Картинка про Пцр тест у кошек что это. Фото Пцр тест у кошек что это

Области применения в медицине

В дерматовенерологии ПЦР используют для выявления венерических заболеваний: микоплазменной, хламидийной инфекций, сифилиса, генитального герпеса и др.
Инфекционисты активно используют ПЦР для диагностики туберкулеза, ВИЧ, вирусных гепатитов, герпеса, мононуклеоза, вируса Эпштейн-Барр и др.). А с помощью ПЦР в реальном времени, оценивая вирусную нагрузку, врачи могут составить мнение о динамике заболевания, отклике на лечение, что особенно актуально для пациентов с ВИЧ, принимающих терапию.
Также благодаря ПЦР врачи могут в течение нескольких дней с уверенностью идентифицировать коклюш и паракоклюш, выявить возбудителей эпидемии ОРВИ. Уточняются типы вируса гриппа, циркулирующие на определенной территории, на основании чего появляется возможность разработать эффективную вакцину для каждого сезона гриппа.
В течение суток или быстрее можно установить вид возбудителя кишечной инфекции, а значит – назначить адекватное лечение и обнаружить вероятный источник заражения.
Летом, ПЦР актуальна для диагностики заболеваний, передаваемых иксодовыми клещами: боррелиоза (болезни Лайма), клещевых энцефалитов.
Метод позволяет работать с любым биологическим материалом. Гемотрансмиссивные инфекции (сифилис, ВИЧ, гепатиты, боррелиоз) исследуются по пробе венозной крови или спинномозговой жидкости. Кожные болезни (герпес, грибки) – по соскобу с пораженного участка. Венерические и урологические – по образцу мочи, спермы, влагалищного отделяемого.
Так что в медицине, ПЦР применяется везде, где нужна высокая точность и быстрота получения результатов.

Лабораторные исследования, выполняющиеся методом ПЦР:

Источник

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *