Ранняя бластоциста что это
Развитие эмбрионов
1 день. Оценка оплодотворения.
Спустя 16-18 часов после инсеминации (слияния полученных ооцитов и спермы) производится первая оценка оплодотворения. К этому времени эмбриолог видит сформировавшиеся пронуклеусы. На данном этапе происходит первая селекция – неоплодотворенные ооциты и аномальные зиготы изолируются от нормальных зигот.
Рис.1 Оплодотворенные яйцеклетки (пронуклеусы) – видны по два клеточных ядра.
2 день. Контроль развития эмбрионов.
Через 48 часов после получения ооцитов эмбриолог оценивает дробление эмбрионов, их морфологию (строение). Под морфологической оценкой понимают количество бластомеров (клеток) и аномалии цитоплазмы и ядра.
Идеальный эмбрион на 2 день должен иметь 4 равных по размеру одноядерных бластомеры без фрагментации.
Рис.2 Слева на картинке идеально сформированный эмбрион, состоящий из 4 бластомеров. Справа – строение нарушено, дальнейшее развитие прекратилось.
3 день. Контроль развития эмбрионов.
Через 72 часа после получения ооцитов производится оценка эмбрионов по следующим параметрам:
Количество бластомеров (клеток)- указывается цифра. В норме – 6-8 клеток.
На 3 день эмбриолог и лечащий врач могут принимать решение о сроке переноса эмбрионов. При переносе эмбрионов на 5 – день, на 3-й день все качественные эмбрионы переносятся в другую среду для культивирования до стадии бластоцисты.
Рис.3 Слева эмбрион отличного качества – оценка 8; Эмбрион по центру имеет небольшую фрагментацию – оценка 6 Sl Fr; Справа эмбрион сильно фрагментирован, подсчет бластомеров затруднен.
4 день. Дальнейшее культивирование эмбрионов.
К 4 дню процесс компактизации должен быть завершен, и эмбрион достигает стадии морулы.
Рис 4. Две отлично сформированные морулы.
5 день. Культивирование эмбрионов и перенос.
К этому времени эмбрион должен развиться до стадии бластоцисты. На основании морфологических признаков делается оценка возможности бластоцисты к дальнейшему развитию и принимается решение о ее пригодности к переносу в полость матки или витрификации (заморозке). Бластоцисты имеют цифровую и буквенную оценки.
Оценка степени развития бластоцисты и статуса хэтчинга (вылупления из оболочки):
1 – ранняя бластоциста: бластоцель меньше половины объема эмбриона (eBl);
2- бластоциста: бластоцель больше половины объема эмбриона (Bl 2);
3- полная бластоциста: бластоцель полностью заполняет эмбрион (Bl 3)$
4- экпандированная бластоциста: бластоцель полностью заполняет эмбрион, истончение зоны внешней оболочки (Bl 4 и Bl 5)
5- вылупляющаяся бластоциста: трофэктодерма начинает выступать их зоны вншней оболочки (Bl 5);
Оценка внутренне клеточной массы:
А – много плотно упакованных клеток;
B – несколько свободно сгруппированных клеток;
C – мало клеток, клетки плохо сгруппированы.
Оценка трофэктодермы:
А – много клеток, формирующих связанный эпителий;
В — несколько клеток, формирующих свободный эпителий;
C — несколько клеток серповидной формы.
Таким образом, эмбрион получает тройную оценку: BL 5АА
Оценка качества эмбрионов в программах ЭКО
Несмотря на то что результативность программ ЭКО зависит от множества факторов, главным и решающим этапом, практически определяющим успешность программы, является эмбриологический. А так как различные манипуляции с эмбрионом человека – это передний край современной науки, можете представить себе сложность терминологии, которую используют эмбриологи в своей повседневной деятельности. Ясности не добавляет и обилие различных классификаций и методов оценки качества используемых клеток.
Мы постараемся доступным языком объяснить, что подразумевается под непонятными сочетаниями букв и цифр и дать понимание того, на основе каких данных врачи принимают решения и дают прогнозы на исход программ ЭКО.
Главный эмбриолог, к.б.н.
Хотим сразу предупредить — ни в коем случае не стоит забывать, что для того, чтобы самостоятельно оценить перспективы и принять решение о переносе эмбриона нужно быть настоящим специалистом, имеющим помимо специального образования достаточный опыт.
В каждом конкретном случае решение и прогноз основывается на совокупности всех известных данных и чаще всего является коллективным решением врача и эмбриолога. Главная сложность состоит в том, что каждому этапу развития эмбриона соответствует своя система оценки качества и способ записи этой оценки. И для того чтобы понимать обозначения вроде «8с» необходимо хотя бы немного разобраться в содержании этих этапов и сопутствующих терминах.
День первый
На первом этапе эмбриолог оценивает признаки оплодотворения после проведенной процедуры ЭКО, ИКСИ, ИМСИ или PICSI. На этом этапе в эмбрионе оценивают наличие, количество, симметричность, внутреннее строение и внешний вид пронуклеусов.
Пронуклеусы — это ядра мужской и женской половых клеток еще не слившихся и несущих одинарный набор хромосом.
По их количеству и внешнему виду оценивают жизнеспособность эмбриона и перспективы возникновения патологий. В норме их должно быть два, они должны иметь относительно равные размеры, находиться рядом и иметь внутри «ядрышки» — пронуклеоли тоже в определенном количестве и расположенные определенным образом. На этом этапе может формироваться множество патологий, например, при присутствии только одного пронуклеуса оплодотворение и не сможет произойти, ведь именно это образование и есть носитель генетического материала, а без участия противоположного пола размножаться мы еще не научились. Пронуклеусов может оказаться и три. Такие эмбрионы часто несут аномальный, тройной набор хромосом и нежизнеспособны. Обычно они погибают до имплантации (прикрепления к стенке матки) или приводят к замершей беременности. Такие эмбрионы отбраковываются и не используются в программах ЭКО.
День второй
Вторые сутки знаменуются соединением ядер женской гаметы и мужской, а также процессом дробления зиготы, которая на этой стадии становится эмбрионом. Численность бластомеров (эмбриональных клеток) – 2–4, но их объем не увеличивается.
Дробление эмбрионов оценивается специалистом по таким критериям:
Уровень фрагментации и численность бластомеров классифицируется по типам следующим образом:
Самый качественный эмбрион — 4А, где 4 — количество бластомеров, А — отсутствие фрагментации.
Эмбрион на второй день
День третий
Продолжается дробление эмбриона, у которого насчитывается от 4 до 9 бластомеров. В начале третьего дня развития запускается собственная генетическая программа, которая в некоторых случаях содержит «опечатки». До этого эмбрион для своего роста «пользуется» веществами, накопленными яйцеклеткой во время ее созревания. Если эмбрион имеет мутации в программе («блок развития»), то далее он не развивается. Это происходит примерно в 20% случаях.
Причиной «блока развития» может быть низкокачественная семенная жидкость или яйцеклетка. Изначальное неудовлетворительное развитие эмбриона свидетельствует о проблемах с яйцеклеткой, если эмбрион «страдает» с третьих суток культивирования, то сперма была ненадлежащего качества. «Блок развития» – это так называемый естественный отбор, эволюционный спасительный механизм, который останавливает развитие некачественных эмбрионов. Как в дальнейшем будет развиваться и расти эмбрион зависит от сформированного генома и своевременности начала его функционирования.
Эмбрион на третий день
День четвертый
К этому сроку эмбрион содержит до восьми бластомер. Клетки контактируют значительно активнее, поверхность у эмбриона немного сглаживается. Культивирование эмбриона третьи сутки характеризуется началом такого процесса, как компактизация, когда границы эмбриональных клеток различить невозможно. Компактизация бывает частичная или полная. Если этот процесс произошел на второй день, то возможно эмбрион развивается неправильно, с отклонениями, что отображается в эмбриологическом протоколе. Готовится переход эмбриона в бластоцисту.
В моруле (трехдневный эмбрион) содержится до 16 бластомеров.
При естественном зачатии на этом сроке эмбрион транспортируется из фаллопиевых труб в матку. По окончании четвертых суток происходит кавитация, когда внутри эмбриона образуется пустота. В процессе эмбрионального роста за пределы зародышевой оболочки выходит определенное количество клеток. Эти клетки при необходимости генетического исследования забирают на анализ. Диагностику проводит эмбриолог на 5–6 сутки, прокалывая зародышевую оболочку. Биопсия абсолютно безопасна для эмбриона и не вредит его развитию. До получения диагностических данных эмбрионы криоконсервируют.
Результаты исследования напрямую повлияют на дальнейшую «судьбу» эмбриона, характеристики которого никак не меняются после размораживания. Современные безопасные технологии замораживания биоматериала позволили широко внедрить в различные программы ВРТ генетическую диагностику. На четвертый день оценка эмбриона малоинформативна, но его можно оценить по численности компактизированных клеток. Чем больше таких клеток, тем вероятнее эмбрион станет бластоцистой.
Оценивание компактизации происходит по классам:
Не во всех лабораториях происходит оценка по такому критерию.
Четвертый день развития. Стадия морулы
День пятый
На данном этапе, включающем период с конца четвертого до начала шестого дня, морула, полость которой составляет половину своего объема, становится бластоцистой, состоящей из двух типов клеток:
Ооцит окружен блестящей оболочкой плотной консистенции (Zona pellucida), выполняющей две функции: она препятствует проникновению в яйцеклетку более одного спермия и удерживает вместе бластомеры. По мере роста внутриэмбриональная полость расширяется, приводя к разрыву оболочки, в результате чего происходит выход бластоцисты или «хэтчинг» (вылупление). На этом этапе оценка эмбриона происходит по таким критериям:
Качество обозначается цифрами (1–5), количество — буквами (А-С).
На пятый день бластоцисты переносят в матку или замораживают. Бластоцисты оценивают по степени зрелости (бластуляция):
Шестой день развития. Стадия бластоцисты
Оценка эмбриобласта
Важнейший критерий внутриклеточной массы (ВКМ) – плотность, сгруппированность. Эмбрион считается более качественным, если отмечается высокая плотность ВКМ.
Критерии трофэктодермы – количество и маленький размер:
Степень приживаемости эмбрионов в полости матки оценивают спустя две недели по исследованию крови на ХГЧ. Более достоверная информация будет получена с помощью УЗ-диагностики через три недели. Вероятность наступления беременности зависит во многом от качества имплантированных эмбрионов. Морфологические данные, используемые для оценивания эмбрионов, являются необходимыми и основными, но этого не всегда достаточно. Иногда при переносе высококачественных эмбрионов они не имплантируются. В других случаях при переносе эмбрионов невысокого качества наступает беременность. Поэтому эмбриологи используют дополнительные варианты оценивания, позволяющие спрогнозировать имплантацию.
Развитие эмбрионов является сложным трудоемким процессом, в котором нужно учитывать массу тонких нюансов, что под силу только высокопрофессиональным специалистам. Если в ходе проведения программы ЭКО удалось довести 40% эмбрионов до этапа бластоцисты отличного качества, то программа считается успешной.
В этом плане криотехнологии, применяемые в протоколах ЭКО, неоценимы, поскольку есть возможность не только перенести в матку высококачественные эмбрионы, но и заморозить оставшиеся. Это преимущество позволяет использовать криозамороженный биоматериал при следующем переносе, минуя несколько небезопасных для здоровья и дорогостоящих этапов.
Данная статья не может быть использована для постановки диагноза, назначения лечения и не заменяет прием врача.
Под микроскопом эмбриолога. Эмбриологический этап в процедуре ЭКО.
Кто такой эмбриолог
Знакомьтесь – эмбриологи. Редкие и уникальные кадры, биологи по образованию. Именно они работают над тем, чтобы «чудо» случилось – оплодотворение и зарождение эмбрионов. Это они оценивают качество эмбрионов и принимают решение: из какого эмбриона получится ваш малыш. Это высококвалифицированные специалисты, которые не только работают день и ночь, но и постоянно учатся, перенимая новые тенденции в науке.
Как развивается эмбрион
В первый день после пункции яйцеклетка превращается в зиготу. Возможно, многие помнят этот термин из школьной биологии. На этом этапе мы видим двойной набор хромосом – 23 хромосомы женщины и 23 хромосомы мужчины. Если образовались два шарика – пронуклеусы – значит, оплодотворение прошло хорошо.
После этого, ночью, происходит первое дробление клетки. Второе, утреннее дробление эмбриологи начинают активно наблюдать. На этот момент они уже видят четырехклеточный эмбрион. На третьи сутки – восьмиклеточный эмбрион. Все эти дни с эмбриона не сводят глаз. Ведь его поведение учитывается при оценке.
На четвертые сутки 10-16 клеток эмбриона сливаются воедино, образовалась морула. И вот, наконец-то, пятый день – бластоциста. Эмбрион, который готов к переносу. Ведь на пятый день он уже имеет сложную структуру, состоящую из 128 клеток. На этой стадии эмбрион обладает наибольшей способностью к имплантации, так как уже преодолел препятствия, возникающие на разных стадиях дробления.
Три или пять дней?
Мы культивируем эмбрионы пять дней. Это очень дорогое удовольствие: гигантская нагрузка на эмбриологическую службу, постоянная смена дорогостоящих сред. Задействовано много инкубаторов. Ведь моделируется маточная труба, она вырабатывает различные вещества, которые эмбриологи заменяют специальными средами.
Если в результате стимуляции у нас получилось много яйцеклеток, то эмбрион будет всегда переноситься на пятые сутки. Эмбриологи дают развиться эмбрионам, чтобы выбрать самого сильного. Ведь если эмбрион дожил до 5 дней в искусственной среде, вероятность того что он приживется в матке возрастает.
В тех случаях, когда было получено не много клеток, и созревает только один эмбрион – может быть принято решение о переносе на третий день. Так специалисты дают возможность эмбриону дозреть в матке, пытаясь всеми силами увеличить шансы на беременность.
Предпочтение отдается все-таки переносу на пятый день, потому что на пятый день остаются самые жизнеспособные эмбрионы. Слабые эмбрионы погибают между третьим и пятым днем.
Пять дней – это целая жизнь для эмбрионов, за этот период они постоянно меняются. На третий день он может казаться качественным, а к пятому дню все может кардинально измениться.
Благодаря системе, которая позволяет культивировать эмбрионы пять дней, в случае, если эмбрионы дожили до этого дня – у нас есть гарантии того, что это жизнеспособные эмбрионы.
Самое интересное. Как происходит отбор
Итак, как вы знаете, каждому эмбриону дают оценку. Существует несколько признанных классификаций эмбрионов. В Клинике Нуриевых используется классификация по Гарднеру. Что это такое? Например, возьмем самый лучший эмбрион. Эмбриологи шутливо называют такой эмбрион «отличник» – 5АА. Первая буква показывает качество внутриклеточной массы (ВКМ) – внутренний слой эмбриона, который дает начало плоду. Чем больше внутренняя масса, тем вероятнее – это А, если мельче – B, совсем мало – С.
Вторая буква – оценка внешнего слоя эмбриона – трофобласта. Цифра постоянно меняется, так как эмбрион растет. Цифру можно не писать, она не существенна при оценке.
Получились разные эмбрионы, всем присвоили разные буквы и цифры. Как же эмбриолог будет выбирать? 5АА – базовая система оценки, но она не дает полной информации для выбора эмбрионов.
«Репутация» эмбрионов
Иногда из двух эмбрионов с разными характеристиками, например, 5АА и 5АB, эмбриолог выбирает для пересадки второй эмбрион, с «неидеальными», казалось бы, показателями. Только на первый взгляд показатели «неидеальны», потому что не только качество двух оболочек определяет жизнеспособность эмбриона. Еще один важный критерий – репутация эмбриона. В нашем примере у эмбриона 5АВ она оказалась лучшей.
Репутация эмбриона складывается из множества факторов, полученных в процессе наблюдения за их «поведением» с 1 по 5 день жизни. Учитывается все: какой эмбрион развивался лучше, какой быстрее дробился, как вел себя на каждом этапе – все это в итоге влияет на судьбу эмбриона.
В любом случае, пациенту могут перенести эмбрионы любого класса. Да, эмбрион с показателями АС слабее, чем АА, но у каждого эмбриона, который дожил до пятого дня, всегда есть шанс на дальнейшую жизнь, и из каждого эмбриона может получиться ребенок. Эти показатели лишь первая видимая, но не единственная его характеристика. Окончательную верную оценку эмбриону может дать только специалист эмбриологической лабораторий. Поэтому делать преждевременные выводы, узнавая показатели своих эмбрионов, ни в коем случае нельзя.
Также надо отметить, что качество эмбриона не имеет прямой связи с шансами и исходами беременности. Каждый случай индивидуален.
Заморозка эмбрионов
В первом стимулированном протоколе мы выбираем самые лучшие эмбрионы и переносим их, – остальные эмбрионы замораживаются. Это позволит Вам получить следующую беременность с меньшими финансовыми затратами и без стимуляции в криопротоколе. Еще несколько лет назад после заморозки и разморозки исходы были хуже, чем в свежих протоколах. Сегодня доказано: свежие и замороженные эмбрионы, имеют абсолютно одинаковые шансы. Наука движется вперед и современные среды для заморозки идеальны, и обеспечивают выживаемость эмбрионов свыше 90 процентов.
В нашей Клинике заморозке подлежат только те эмбрионы, которые смогут ее пережить, и соответственно, дать начало беременности уже после разморозки.
У эмбриологов есть четкая сложная инструкция, по которой происходит отбор эмбрионов для заморозки. На решение влияет множество факторов: качество бластоцисты, репутация эмбриона, какой у женщины по счету протокол, какой диагноз и т.д. Принять правильное решение, о том, какой эмбрион замораживать может только эмбриолог.
Как замораживаются эмбрионы? Только методом витрификации. Витрификация – мгновенный способ заморозки, с добавлением специальных растворов – криопротекторов, которые исключают образование кристаллов льда, повреждающих клетки. Механические повреждения сводятся к нулю. Благодаря этому выживаемость эмбрионов составляет более 90 процентов. В нашей Клинике этот метод начал применятся с самой первой заморозки и используется по сегодняшний день.
Вы – наш пациент, и мы заботимся о Вас. И мы знаем, как непросто проходить через протокол ЭКО.
Все те пять дней, которые требуются эмбриону для полноценного развития, Вам хочется знать, что с ним происходит. Мы написали эту статью, чтобы объяснить вам суть этого сложного этапа.
В эмбриологической лаборатории нашей Клиники созданы идеальные условия для культивирования и хранения эмбрионов. Доверьтесь своему врачу и эмбриологам, они помогут вам найти оптимальный вариант.
Помните, что над вашим протоколом ЭКО трудится не только врач, а вся команда Клиники Нуриевых, которая каждый день думает над тем, как сделать ваше лечение комфортным и эффективным. Постарайтесь провести эти дни в приятных эмоциях и просто отдохнуть. Тогда, все вместе, мы обязательно добьемся успеха.
Стадии развития эмбрионов
Однако наличие зигот еще недостаточно для решения вопроса о возможности переноса эмбрионов в полость матки. Сначала необходимо удостовериться в нормальном дроблении и развитии эмбрионов.
Об этом можно судить только исходя из количества и качества делящихся клеток эмбриона и не ранее, чем через сутки после оплодотворения, когда появляются первые признаки дробления.
Наиболее четко они проявляются только на второй день культивирования.
Каждый день эмбриологом проводится оценка эмбрионов с фиксацией всех параметров: количество и качество клеток эмбриона (бластомеров), скорость дробления, наличие отклонений и т.д.
Переносу подлежат только эмбрионы хорошего качества.
До недавнего времени эмбрионы культивировались в течение трех дней и затем переносились в матку и/или замораживались.
В настоящее время широко распространено так называемое продленное культивирование эмбрионов в течение пяти или шести дней, пока они не достигают стадии бластоцисты.
Бластоцисты имеют большую частоту успешной имплантации, позволяя нам переносить меньшее количество эмбрионов и снижать риск многоплодной беременности при увеличении частоты наступления беременности.
Вы можете получить ответ на все возникшие вопросы, воспользовавшись формой обратной связи или лично на консультации у врача репродуктолога.
ФОТО БУДУЩИХ ЭМБРИОНОВ
Начало
На рисунке справа: Комплекс ооцит-корона-кумулюс через 1 час после получения. Ооцит кажется нормальным. Клетки кумулюса диспергированы, однако клетки короны остаются плотными и полярное тельце не визуализируется, поэтому только удаление короны позволит точно определить степень зрелости ооцита.
На рисунке слева: Комплекс ооцит-корона-кумулюс через час после получения. Нормальный ооцит хорошей формы. Клетки кумулюса хорошо диспергированы. Полярное тельце на 11 часах.
День I (16-20 часов после инсеминации или ИКСИ).
На рисунке слева: Аномальная фертилизация. Через 18 часов после ИКСИ ооцит правильной формы с единственным пронуклеусом и тремя нуклеолями. Перивителлиновое пространство слегка расширено, содержит множество маленьких гранул. 5-6 цитоплазматических фрагментов, включая полярные тельца, видны на 11-12 часах
На рисунке справа: Триплоид
День 2: несостоявшееся первое деление. Единственный бластомер содержит пять маленьках ядер, множественная цитоплазматическая фрагментация. Дальнейшее развитие крайне мало вероятно.
День 2: асимметричное незавершенное первое деление. Дальнейшее развитие крайне мало вероятно.
Двухклеточный эмбрион, с легкой асимметрией и фрагментацией.
3-клеточный эмбрион с асинхронным делением, и легкой фрагментацией на 5 часах. Три ядра в большом бластомере и ни одного в остальных.
Морфологически ненормальный 4-клеточный эмбрион с выраженной фрагментацией, занимающей около половины объема эмбриона. Жизнеспособность таких эмбрионов резко снижена. Развитие обычно останавливается.
Морфологически нормальный 4-клеточный эмбрион. Все бластомеры одинаковой величины, с ядром и полярным тельцем на 8 часах.
Медленный 5 клеточный эмбрион: 4 одинаковых и один меньший бластомер Такие эмбрионы часто останавливаются в развитии.
Компактизация 4-клеточного эмбриона на день 3. Нередко наблюдается в среде G1.1. Биопсия эмбриона затруднена. Чтобы провести биопсию прибегают к декомпактизации, применяя среды без кальция и магния.
8-клеточный эмбрион неправильной вытянутой формы. Развитие таких эмбрионов сомнительно. Биопсия также затруднена.
День 3. 8-клеточные эмбрионы с несколькими цитоплазматическими фрагментами, которые не нарушают развитие и компактизацию эмбрионов
Рисунок 1. День 5. Ранняя бластоциста, 120 часов после инсеминации. Бластоцеле сформировано большими овальными клетками развивающегося трофобласта. Круглые клетки, сконцентри-рованные в нижнем полюсе, образуют внутреннюю клеточную массу.
Рисунок 2. День 5. Ранняя бластоциста, 120 часов после инсеминации. Бластоцеле занимает около половины зародыша. Клетки трофоэктодермы уплощены и растянуты, что аккомодирует экспансию. Клетки внутренней массы различимы внутри полости бластоцисты.
Рисунок 3. День 5, ранняя бластоциста через 120 часов после инсеминации. Клетки полигональны и тесно соединены. Ядра видны в большинстве клеток.
Рисунок 4. День 5, аномальная ранняя бластоциста через 120 часов после инсеминации состоит из небольшого бластоцеле, сформированного меньшим количеством больших плоских клеток. Все еще заметно первителлиновое пространство. Нормальное развитие такой бластоцисты мало вероятно.
Рисунок 5. День 6, аномальное развитие эмбриона.144 часа после инсеминации трофобласт состоит из большой полости, сформированной монослоем клеток трофоэктодермы. Клетки внутренней массы не идентифицируются Зона пеллюцида очень тонкая.
Рисунок 6. День 6, бластоциста в самом начале процесса хетчинга. Несколько клеток трофоэктодермы видны на 12 часах за пределами зоны пеллюцида, также как внутренняя клеточная масса.
Рисунок 7 и 8. Хэтчинг бластоцисты через 130 часов после инсеминации через V-образное отверстие, сделанное ранее в зоне пеллюцида для биопсии бластомера. Хетчинг эмбрионов при наличии отверстий происходит раньше, чем в интактных эмбрионах.
Полностью вылупившаяся морфологически нормальная бластоциста 130-l40 часов после инсеминации (a) и (b). V-образное отверстие было сделано ранее в зоне пеллюцида для биопсии бластомера. Внутренняя клеточная масса ясно видна в каждой бластоцисте.